《新三國》中劉備是于和偉演的。1999年，參演個人首部電視劇《曹操》，從而正式進入演藝圈。2003年，參演高希希執導的抗戰劇《曆史的天空》。2004年，在情感劇《搭錯車》中飾演蘇民生。2009年，在古裝劇《三國》中飾演劉備。2011年，搭檔主演電視劇《青盲》。2011年，憑借電視劇《幸福在路上》獲得南方盛典最佳男演員獎。2012年5月22日，獲得MSN星月年度最具價值男演員獎。2014年，主演都市情感劇《下一站婚姻》，并憑借該劇獲得第17屆華鼎獎當代題材最佳男演員獎。
2015年8月9日，憑借電視劇《下一站婚姻》獲得第17屆華鼎獎最佳男演員獎。2017年9月16日，憑借電影《我不是潘金蓮》獲得第31屆中國電影金雞獎最佳男配角。2018年，于和偉憑借《大軍師司馬懿之軍師聯盟》獲得第24屆上海電視節白玉蘭獎最佳男配角。2019年9月10日，主演的電視劇《人民的正義》開機；同年，獲得第十七屆電影表演藝術學會獎。
電視劇《新三國》中于和偉飾演的劉備字玄德，三國時期蜀漢開國皇帝，政治家，史家又稱他為先主。劉備少年與公孫瓒拜盧植為師求學，而後參與鎮壓黃巾起義。與關羽、張飛先後救援過北海孔融、徐州陶謙等。陶謙病亡後将徐州讓與劉備。
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