組織芯片制作組化統一實驗條件實驗報告-上海鄭核

一、實驗器材及試劑

1、實驗器材

名稱 廠家 型号

脫水機 武漢俊傑電子有限公司 JJ-12J

包埋機 武漢俊傑電子有限公司 JB-P5

凍台 武漢俊傑電子有限公司 JB-L5

病理切片機 上海徕卡儀器有限公司 RM2016

組織攤片機 浙江省金華市科迪儀器設備有限公司 KD-P

烤箱 天津市萊玻瑞儀器設備有限公司 GFL-230

防脫載玻片 Servicebio

正置光學顯微鏡 日本尼康 Nikon Eclipse E100

成像系統

組織芯片融合儀 日本尼康

Servicebio Nikon DS-U3

JX-10

組織芯片取樣手柄 Servicebio SH-10,15,20,30,50

受體底座蠟塊 Servicebio RP-10,15,20,30,50

包埋底模 Servicebio B-1

2、主要實驗試劑

試劑 廠家 貨号

二甲苯 國藥集團化學試劑有限公司 10023418

無水乙醇 國藥集團化學試劑有限公司 100092683

HE染液套裝 servicebio G1005

鹽酸 國藥集團化學試劑有限公司 10011008

氨水 國藥集團化學試劑有限公司 10002118

中性樹膠 國藥集團化學試劑有限公司 10004160

二、石蠟切片制作

1、取材：新鮮組織用固定液固定24h以上。将組織從固定液取出在通風櫥内用手術刀将目的部位組織修平整，将修切好的組織和對應的标簽放于脫水盒内。

2、脫水浸蠟：将脫水盒放進吊籃裡于脫水機内依次梯度酒精進行脫水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-無水乙醇I 30min-無水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-65°融化石蠟I 1h-65°融化石蠟II 1h-65°融化石蠟III 1h。

3、包埋：将浸好蠟的組織于包埋機内進行包埋。先将融化的蠟放入包埋框，待蠟凝固之前将組織從脫水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并貼上對應的标簽。于-20°凍台冷卻，蠟凝固後将蠟塊從包埋框中取出并修整蠟塊。

4、切片：将修整好的蠟塊置于石蠟切片機切片，厚4μm。切片漂浮于攤片機40℃ 溫水上将組織展平，載玻片将組織撈起，60℃ 烘箱内烤片。水烤幹蠟烤化後取出常溫保存備用。

三、HE染色與定位

1、石蠟切片脫蠟至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，自來水洗。

2、蘇木素染色：切片入蘇木素染3-5min，自來水洗，分化液分化，自來水洗，返藍液返藍，流水沖洗。

3、伊紅染色：切片依次入85%、95%的酒精脫水各5min，入伊紅染液中染色5min。

4、脫水封片：将切片依次入無水乙醇Ⅰ5min -無水乙醇Ⅱ5min -無水乙醇Ⅲ5min-二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min透明，中性樹膠封片。

5、顯微鏡鏡檢，确定芯片取點部位。

四、組織芯片制作

1、根據組織點的制備要求選取相應規格的組織芯片取樣器和受體蠟塊；

2、根據HE定位用取樣器對目的部位的組織點進行取樣，得到供體的組織柱。按照芯片矩陣要求，将所取的供體組織柱點按既定的順序依次注入到相應受體蠟塊孔内；

3、利用組織芯片融合儀對供體組織柱點和受體蠟塊進行多次反複融合，使二者完全融合制作成組織芯片蠟塊。

五、組織芯片切片

1、将修整好的組織芯片蠟塊置于石蠟切片機上切片，片厚4μm。 切片漂浮于攤片機40℃溫水上将組織展平，用載玻片将組織撈起，并放進60℃烘箱内烤片。待水烤幹蠟烤化後取出常溫保存備用。

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